【仪器性能】
美国GE Healthcare的BiacoreTM T200生物分子相互作用分析仪,采用实时、无标记的表面等离子共振(SPR)技术,可实现观测生物分子之间相互作用。
【仪器特点】
基于表面等离子共振现象(SPR现象),能够实时、动态的观测两种分子之间结合的特异性,它们之间结合力的强弱以及结合与解离速率的快慢,还能帮助阐述多个生物分子之间的结合过程以及作用机理,比如结合过程中有多少个协同者和参与者。该系统广泛应用于药物研究与开发,包括蛋白质/抗体/多肽药物,核酸药物等各类基于药物与靶标特异性亲和力的药物筛选和开发。
【技术应用】
主要可开展以下两大方面的应用:
1、动力学检测:实时在线测定抗原抗体相互作用的结合和解离过程,并精确测定生物分子相互结合常数Kon,解离常数Koff和亲和常数KD值。
(1)适用样品范围:适合各类待测样品,蛋白,核酸,多肽,小分子化合物等;包括含血清的培养液,离心上清液,细胞裂解液,含DMSO溶液等各类粗样。
(2)可用于疾病形成机理、信号转导过程及致病关键生物分子和药物靶标的筛选和分析。
(3)药物筛选:2通道可同时检测,适合中低通量的药物筛选。可利用疾病发生、信号转导及表达调控中的关键生物分子作为靶标,筛选和分析潜在的治疗性药物。
(4)蛋白的结构与功能研究。
2、蛋白浓度定量:通过绘制不同浓度抗体针对同一蛋白的结合率(Binding Rate)的标准曲线,在检测未知蛋白浓度样品时,通过其与特异结合蛋白的结合率就能计算得到该蛋白在目标溶液中的浓度。相较于传统的蛋白浓度定量检测方法,具有梯度范围宽,通量高,检测重复性好,无需复杂的样品前处理等特点。